LOK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423191

Descripción general

Stk10 codifica la quinasa orientada a linfocitos (LOK), una quinasa de serina/treonina de la familia STE20 que conecta la señalización aguas arriba con la remodelación del citoesqueleto y el comportamiento de las células inmunitarias en el ratón. LOK participa en vías que regulan la dinámica de la actina, la polaridad celular y la adhesión, influyendo en procesos como la migración de linfocitos, la organización de la sinapsis inmunológica y la respuesta a señales de activación. En contextos hematopoyéticos, la alteración de la señalización de STK10/LOK se ha asociado con una homeostasis inmunitaria desregulada y fenotipos anómalos de motilidad celular, lo que la hace relevante para estudios de biología vinculada a la inflamación. La función de LOK también se cruza con puntos de control regulados por quinasas que moldean programas de proliferación y supervivencia, apoyando trabajos mecanísticos sobre redes de señalización en estados celulares normales y relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LOK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Stk10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Stk10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Stk10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LOK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Stk10 para la investigación de la señalización de LOK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Stk10 críticos para la función de LOK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Stk10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LOK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LOK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Stk10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LOK (m) y el plásmido HDR LOK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Stk10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Stk10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.