LOC729991-MEF2B Plasmide Double Nickase (h): sc-405289-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LOC729991-MEF2B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LOC729991-MEF2B Double Nickase Plasmid (h) e il LOC729991-MEF2B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BORCS8-MEF2B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LOC729991-MEF2B Plasmide Double Nickase (h) | sc-405289-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LOC729991-MEF2B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405289-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BORCS8-MEF2B codifica un prodotto proteico chimerico BORCS8–MEF2B (LOC729991-MEF2B) che collega un componente del complesso BORC, il quale regola il posizionamento dei lisosomi e il trasporto mediato da chinesina, con MEF2B, un fattore di trascrizione MADS-box coinvolto nella regolazione genica dipendente dall’attività. La segnalazione della famiglia MEF2 integra input di calcio/MAPK per controllare programmi trascrizionali che governano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress, mentre il traffico associato a BORC influisce sull’autofagia e sull’omeostasi endolisosomiale. La deregolazione di MEF2B è stata associata a un controllo trascrizionale alterato nella biologia linfoide, inclusi ricorrenti riarrangiamenti/genomiche alterazioni riportate nelle neoplasie a cellule B, rendendo questo locus rilevante per analizzare il crosstalk tra trascrizione e traffico in contesti cellulari pertinenti alla malattia.
LOC729991-MEF2B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BORCS8-MEF2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BORCS8-MEF2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BORCS8-MEF2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BORCS8-MEF2B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.