LNX3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403866

Descripción general

PDZRN3 codifica LNX3, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que contiene dominios PDZ e implicada en el control dependiente de ubiquitina de la estabilidad y el tráfico de proteínas. A través de sus interacciones de andamiaje mediadas por PDZ y su actividad de ubiquitinación dependiente del dominio RING, LNX3 está en posición de regular la arquitectura de las redes de señalización en la membrana plasmática y en compartimentos de unión o del citoesqueleto, influyendo en procesos como la polaridad celular, la dinámica de adhesión y los programas de diferenciación. PDZRN3/LNX3 se ha relacionado con vías implicadas en el patrón del desarrollo y la remodelación tisular, donde una señalización de ubiquitina alterada puede modificar las salidas transcripcionales y las transiciones de estado celular. Se ha informado de la desregulación de la expresión de PDZRN3 o de la ubiquitinación mediada por LNX3 en contextos relevantes para enfermedad, incluidos el control aberrante del crecimiento y la remodelación fibrótica o inflamatoria, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de señalización y proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LNX3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDZRN3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDZRN3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDZRN3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LNX3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDZRN3 para la investigación de la señalización de LNX3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDZRN3 críticos para la función de LNX3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDZRN3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LNX3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LNX3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDZRN3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LNX3 (h) y el plásmido HDR LNX3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDZRN3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDZRN3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.