LMX1B Double Nickaseプラスミド (h): sc-402945-NIC

LMX1Bは、発生過程における細胞運命の決定や組織パターニングを制御するLIMホメオボックス型転写因子をコードしており、四肢の背側化、腎臓ポドサイトの分化、神経サブタイプの同一性の確立などで重要な役割を担います。LMX1Bは、LIMドメインを介したコファクターとの相互作用と、ホメオドメインによるDNA結合を通じて、細胞外マトリックスの構築、細胞骨格動態、モルフォゲンシグナル伝達ネットワークに影響する転写プログラムを統合的に調節します。LMX1Bの遺伝子異常は爪膝蓋骨症候群（Nail–patella syndrome）と関連し、ポドサイト機能障害および腎症状とも結び付くことから、発生における遺伝子制御や糸球体生物学の研究において重要な標的となっています。さらに、LMX1Bの発現変化は、がん細胞の系譜状態や転写ネットワークの再配線という文脈でも検討されています。

LMX1B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LMX1B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LMX1B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LMX1Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LMX1Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。