LMX1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402945

概要

LMX1Bは、発生過程における細胞運命の決定や組織パターニングを制御するLIMホメオボックス型転写因子をコードしており、とりわけ四肢の背側アイデンティティの確立、ポドサイト分化、ならびに神経サブタイプのプログラムに重要な役割を果たします。LMX1Bは、LIMドメインを介した転写共役因子との相互作用と、ホメオドメインによるDNA結合を協調させることで遺伝子発現を制御し、形態形成、細胞外マトリックスの組織化、細胞骨格構築に影響を与えます。腎臓生物学の観点では、LMX1Bはポドサイトの遺伝子ネットワークを調節することで糸球体ろ過障壁の完全性を維持し、スリット膜の構造やアクチンダイナミクスを司る経路と関連します。LMX1Bの遺伝学的異常は、爪膝蓋骨症候群（nail–patella syndrome）および関連する腎・骨格表現型と結び付けられており、発生および器官形成における転写制御を研究するうえで重要な標的となります。

LMX1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLMX1B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LMX1B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LMX1Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LMX1Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LMX1Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LMX1B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LMX1Bの機能に不可欠なLMX1Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LMX1Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LMX1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLMX1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LMX1B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LMX1B HDRプラスミド（h）および LMX1B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLMX1Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLMX1B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。