LMX1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402945-ACT

LMX1Bは、系譜（ラインエージ）決定と器官形成を制御するLIMホメオボックス型転写因子をコードしており、四肢の背側パターニング、腎糸球体の発生、神経分化などで重要な役割を担います。核内では、LMX1Bはホメオドメインを介してDNAに結合し、LIMドメイン依存的なタンパク質相互作用を通じて転写プログラムを協調的に制御することで、細胞アイデンティティや発生に関わる遺伝子ネットワークの形成に寄与します。LMX1B活性の異常は、爪・骨格・腎臓の異常を伴う先天性症候群と関連しており、発現変動はポドサイト機能障害や神経発達に関わる表現型の文脈でも検討されています。発生制御因子としてLMX1Bは、関連するヒト細胞モデルにおける転写制御、エンハンサーの作動原理、細胞運命転換の研究に広く用いられています。

LMX1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LMX1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LMX1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LMX1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLMX1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LMX1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLMX1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLMX1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLMX1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLMX1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。