Plásmido Doble Nickase (h) LKB1: sc-400313-NIC

STK11 codifica la quinasa de serina/treonina LKB1, un regulador maestro de la homeostasis energética celular que activa AMPK y una familia de quinasas relacionadas con AMPK para coordinar el metabolismo, la autofagia y las respuestas al estrés. A través de estas vías, LKB1 modula la señalización de mTOR, la polaridad celular y la organización epitelial, conectando la detección de nutrientes con el control del crecimiento. LKB1 también influye en la progresión del ciclo celular y mantiene la arquitectura genómica y tisular al integrar señales que afectan a la proliferación y la diferenciación. Las alteraciones con pérdida de función en STK11 son recurrentes en cánceres humanos y se asocian con una reprogramación metabólica y con programas de polaridad alterados, lo que convierte a este eje en un elemento central en los estudios de biología tumoral y regulación del estado celular.

LKB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STK11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STK11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STK11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STK11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.