Plásmido CRISPR de Activación (h) LIN-28B: sc-402851-ACT

El gen humano LIN28B codifica la proteína de unión a ARN LIN-28B, un regulador heterocrónico que suprime la maduración de la familia de microARN let-7 y, con ello, remodela los programas de regulación génica postranscripcional que controlan la proliferación, el metabolismo y el compromiso de linaje. Al modular redes dependientes de let-7, LIN-28B influye en la temporización del desarrollo, los estados celulares tipo madre y la reprogramación celular, e interactúa con vías asociadas a las salidas de señalización de MYC, RAS/MAPK y mTOR. La actividad desregulada de LIN28B se ha asociado con una diferenciación alterada y un control del crecimiento aberrante en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluidos programas transcripcionales oncogénicos y trastornos del desarrollo pediátricos. Estas propiedades hacen de LIN28B un nodo útil para estudiar la biogénesis de miARN, el metabolismo del ARN y los circuitos de regulación génica en células humanas.

LIN-28B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LIN28B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LIN-28B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LIN28B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LIN28B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LIN-28B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LIN28B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LIN-28B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LIN-28B en células tumorales con expresión de LIN28B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.