Plasmide CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (h): sc-401229

Présentation

CDH17 code la LI-cadhérine, une cadhérine non classique enrichie dans l’épithélium intestinal, qui assure une adhésion cellule–cellule dépendante du calcium et contribue à la polarité épithéliale ainsi qu’à la fonction de barrière. Contrairement aux cadhérines classiques, la LI-cadhérine ne possède pas le domaine canonique de liaison aux caténines, ce qui l’associe à des mécanismes distincts contrôlant l’organisation des jonctions, l’architecture tissulaire et le tri cellulaire. Les altérations de l’expression et de la localisation de CDH17 sont fréquemment étudiées dans le cadre du remodelage de l’épithélium gastro-intestinal et des modifications liées aux tumeurs touchant l’adhésion, l’invasion et les programmes de différenciation. En tant que molécule d’adhésion associée à une lignée, la LI-cadhérine est également utilisée pour étudier comment les récepteurs d’adhésion membranaires s’articulent avec la régulation du cytosquelette, l’inhibition de contact et les signaux du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDH17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDH17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDH17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LI-cadherin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDH17 pour l'étude de la signalisation de LI-cadherin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDH17 essentiels à la fonction de LI-cadherin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDH17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LI-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LI-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDH17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LI-cadherin plasmide HDR (h) et le LI-cadherin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDH17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDH17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.