LI-cadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401229

Panoramica

CDH17 codifica per la LI-caderina, una caderina non classica arricchita nell’epitelio intestinale che media l’adesione cellula–cellula dipendente dal calcio e contribuisce alla polarità epiteliale e alla funzione di barriera. A differenza delle caderine classiche, la LI-caderina è priva del dominio canonico di legame alle catenine, il che la collega a meccanismi distinti che controllano l’organizzazione delle giunzioni, l’architettura tissutale e lo smistamento cellulare. Alterazioni dell’espressione e della localizzazione di CDH17 sono frequentemente studiate nel rimodellamento dell’epitelio gastrointestinale e nei cambiamenti associati ai tumori riguardanti adesione, invasione e programmi di differenziazione. In quanto molecola di adesione associata a una specifica linea cellulare, la LI-caderina viene inoltre utilizzata per studiare come i recettori di adesione di membrana si interfacciano con la regolazione del citoscheletro, l’inibizione da contatto e i segnali del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDH17 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDH17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDH17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LI-cadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDH17 per lo studio della segnalazione di LI-cadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDH17 critici per la funzione di LI-cadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDH17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDH17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LI-cadherin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LI-cadherin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDH17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDH17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.