LHX1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403100-LAC

LHX1 (LIM homeobox 1) codifica un fattore di trascrizione con dominio LIM che integra il legame al DNA con il reclutamento di cofattori per controllare le reti regolatorie geniche dello sviluppo. Contribuisce alla specificazione del destino cellulare e ai programmi di patterning tissutale, inclusi processi rilevanti per la prima embriogenesi e l’organogenesi, coordinando moduli trascrizionali a valle di vie morfogenetiche come la segnalazione WNT, BMP e FGF. Nella biologia umana, un’alterata regolazione di LHX1 è associata ad anomalie congenite dello sviluppo ed è stata studiata in contesti in cui l’identità di linea e gli stati di differenziamento risultano deregolati. In quanto regolatore nucleare della trascrizione, LHX1 è spesso utilizzato come marcatore e come nodo funzionale negli studi sulla segnalazione dello sviluppo, sui circuiti trascrizionali e sulla riprogrammazione di linea.

Le particelle di attivazione lentivirale LHX1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di LHX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LHX1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione LHX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LHX1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo LHX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.