LEO1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407864

Descripción general

LEO1 codifica un componente central del complejo humano PAF1, que se asocia con la ARN polimerasa II para coordinar la elongación de la transcripción, la liberación de la pausa proximal al promotor y el procesamiento del ARN co-transcripcional. Mediante interacciones con factores de elongación y asociados a la cromatina, LEO1 contribuye a la dinámica de las modificaciones de histonas y a la regulación de programas de expresión génica que controlan la proliferación y la diferenciación. La actividad alterada del complejo PAF1, incluida la perturbación de LEO1, se ha vinculado con la desregulación transcripcional y la inestabilidad genómica observadas en múltiples contextos de cáncer. Como resultado, LEO1 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la regulación epigenética de la transcripción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LEO1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LEO1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LEO1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LEO1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LEO1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LEO1 para la investigación de la señalización de LEO1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LEO1 críticos para la función de LEO1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LEO1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LEO1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LEO1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LEO1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LEO1 (h) y el plásmido HDR LEO1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LEO1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LEO1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.