LEO1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407864

Panoramica

LEO1 codifica un componente centrale del complesso umano PAF1, che si associa alla RNA polimerasi II per coordinare l’allungamento della trascrizione, il rilascio della pausa prossimale al promotore e la processazione co-trascrizionale dell’RNA. Attraverso interazioni con fattori di elongazione e associati alla cromatina, LEO1 contribuisce alla dinamica delle modificazioni istoniche e alla regolazione di programmi di espressione genica che controllano proliferazione e differenziamento. Un’alterata attività del complesso PAF1, incluse perturbazioni di LEO1, è stata collegata alla deregolazione trascrizionale e all’instabilità genomica osservate in molteplici contesti tumorali. Di conseguenza, LEO1 è spesso studiato in vie che governano il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la regolazione epigenetica della trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LEO1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LEO1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LEO1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LEO1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LEO1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LEO1 per lo studio della segnalazione di LEO1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LEO1 critici per la funzione di LEO1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LEO1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LEO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LEO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LEO1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LEO1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LEO1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LEO1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LEO1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.