Plasmide Double Nickase (h) LCAT: sc-405225-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LCAT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LCAT Double Nickase (h) et le plasmide LCAT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LCAT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LCAT Antibody (D-2): sc-376682
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LCAT | sc-405225-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LCAT | sc-405225-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La LCAT humaine (lécithine–cholestérol acyltransférase) est une enzyme sécrétée qui catalyse l’estérification du cholestérol libre à la surface des lipoprotéines, générant des esters de cholestéryle qui soutiennent la maturation des HDL et le transport inverse du cholestérol. En remodelant les phospholipides et en régulant la composition des particules lipoprotéiques, la LCAT influence des voies d’homéostasie lipidique liées à l’efflux du cholestérol, à la fonction des apolipoprotéines et au trafic lipidique systémique. Une activité altérée de la LCAT est associée à des phénotypes de dyslipidémie et à des profils lipoprotéiques anormaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie du risque cardiométabolique. Dans les systèmes expérimentaux, la perturbation de la LCAT est utilisée pour analyser les relations entre la biogenèse des HDL, la gestion du cholestérol par les macrophages et la signalisation inflammatoire induite par les lipides.
LCAT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LCAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LCAT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LCAT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LCAT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.