Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide Double Nickase (h) LAT1: sc-401609-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LAT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LAT1 Double Nickase (h) et le plasmide LAT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SLC7A5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LAT1 Antibody (D-10): sc-374232
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LAT1 | sc-401609-NIC | 20 µg | $410.00 |
SLC7A5 code pour le transporteur d’acides aminés de type L 1 (LAT1), un transporteur du système L indépendant du sodium, qui forme un hétérodimère avec SLC3A2 (CD98hc) afin de faciliter l’entrée de grands acides aminés essentiels neutres tels que la leucine, la phénylalanine et la tyrosine. En régulant la disponibilité intracellulaire des acides aminés, LAT1 influence des programmes de détection des nutriments, notamment la signalisation mTORC1, le contrôle de la traduction et l’adaptation métabolique cellulaire. L’activité de LAT1 soutient des états prolifératifs et de réponse au stress en couplant le transport des acides aminés aux besoins redox et bioénergétiques, reliant ainsi le transport membranaire aux réseaux de signalisation des facteurs de croissance et des oncogènes. Des altérations de l’expression de SLC7A5 et de la capacité de transport des acides aminés ont été associées à un métabolisme dérégulé en oncologie, ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques, où le flux d’acides aminés influe sur les précurseurs des neurotransmetteurs et l’homéostasie cellulaire.
LAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC7A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC7A5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC7A5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC7A5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.