LAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401281

Übersicht

Der Linker for Activation of T cells (LAT) ist ein transmembranes Adapterprotein, das nach der Aktivierung des T‑Zell‑Rezeptors (TCR) an Tyrosinresten phosphoryliert wird und als Gerüst (Scaffold) für den Aufbau multiproteinärer Signaltransduktionskomplexe dient. LAT koordiniert die Rekrutierung von GRB2, GADS, PLCγ1 und SOS, um die Signalweiterleitung über Calciumfluss sowie die Ras–MAPK/ERK- und NFAT/NF‑κB‑Signalwege zu vermitteln, und prägt dadurch T‑Zell‑Aktivierung, Zytokinproduktion und die Organisation der immunologischen Synapse. In humanen Zellen ist eine veränderte LAT‑abhängige Signalintegration für Studien zur Immundysregulation relevant, einschließlich Mechanismen, die zu Autoimmunität, immundefizienzähnlichen Phänotypen und aberranten Programmen der Lymphozytenaktivierung beitragen. Da LAT einen kritischen Knotenpunkt in der proximalen TCR‑Signalgebung darstellt, wird es häufig als Ansatzpunkt genutzt, um Verschaltung von Signalwegen, Feedback‑Kontrolle sowie die Kodierung von Signalstärke und ‑dauer in der adaptiven Immunität zu untersuchen.

Das LAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LAT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LAT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LAT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LAT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LAT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LAT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LAT-Exone abzielen, die für die LAT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LAT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LAT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LAT HDR-Plasmid (h) und LAT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LAT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LAT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.