LASP-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-421388-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LASP-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LASP-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und LASP-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Lasp1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LASP-1: sc-374059
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LASP-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421388-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LASP-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421388-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lasp1 kodiert das LIM- und SH3-Protein 1 (LASP-1), einen aktinbindenden Adapter, der besonders an fokalen Adhäsionen, Lamellipodien und Membranruffles angereichert ist, wo er die Koordination von Zytoskelett-Umbau und Zellmotilität unterstützt. Über Interaktionen mit aktinassoziierten Proteinen und Signalkomplexen trägt LASP-1 zur Adhäsionsdynamik, Migration und zu Mechanotransduktionswegen bei, die mit der Bindung an die extrazelluläre Matrix verknüpft sind. In Mausmodellen wird die Lasp1-Aktivität häufig im Kontext epithelial-mesenchymaler Verhaltensweisen, der Wundheilung und des Gewebeumbaus untersucht, bei denen Veränderungen in Adhäsions- und Invasionsprogrammen im Vordergrund stehen. Eine veränderte LASP-1-Expression und -Lokalisation wurde in mehreren krankheitsrelevanten Modellen mit dysregulierter Migration und proliferativer Signalübertragung in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Knotenpunkt für das Studium der zytoskelettalen Kontrolle und metastasenähnlicher Phänotypen unterstreicht.
LASP-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Lasp1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Lasp1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Lasp1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Lasp1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.