Particules Lentivirales d'Activation (h) LARGE2: sc-414150-LAC

Le gène humain LARGE2 code une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui contribue à la glycosylation post-traductionnelle des protéines extracellulaires et membranaires, notamment dans les voies impliquées dans l’élaboration du matriglycane sur l’α-dystroglycane. En modulant la structure des glycannes, LARGE2 influence l’adhérence cellule–matrice, l’organisation des récepteurs et des événements de signalisation liés aux interactions avec la membrane basale et à l’intégrité tissulaire. Une activité altérée de LARGE2 peut perturber la fonction des glycoprotéines et la communication avec la matrice extracellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des défauts de glycosylation du dystroglycane et, plus largement, des phénotypes associés aux anomalies de glycosylation. L’expression de LARGE2 est donc fréquemment analysée dans des modèles reliant les programmes de glycosylation golgienne à la biologie neuromusculaire et au développement.

Les particules d'activation lentivirales LARGE2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LARGE2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LARGE2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LARGE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LARGE2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LARGE2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.