Plásmido CRISPR de Activación (h) Langerin: sc-401949-ACT

CD207 codifica Langerina, un receptor de lectina tipo C enriquecido en las células de Langerhans y en subpoblaciones relacionadas de células dendríticas, que participa en el reconocimiento de patógenos y la captura de antígenos en las barreras epiteliales. La langerina se une a motivos de carbohidratos de manera dependiente de Ca²⁺ y media la endocitosis hacia los gránulos de Birbeck, modelando los programas de procesamiento y presentación de antígenos que influyen en la activación de la inmunidad adaptativa. Mediante la captación impulsada por lectinas y su direccionamiento a compartimentos endosomales, se conecta con la detección inmunitaria innata y con la señalización inflamatoria que modulan la producción de citocinas y la polarización de células T. Las alteraciones en la expresión de CD207/langerina o en la función de las células de Langerhans son relevantes para estudios sobre la homeostasis inmunitaria de la piel, la inflamación alérgica y las respuestas inmunitarias de barrera asociadas a infecciones.

Langerin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD207 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Langerin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD207 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD207, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Langerin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD207 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Langerin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Langerin en células tumorales con expresión de CD207 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.