LAMP-2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421383-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LAMP-2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LAMP-2 Double-Nickase-Plasmid (m) und LAMP-2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Lamp2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LAMP-2: sc-20004
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LAMP-2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421383-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LAMP-2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421383-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Lamp2* kodiert das lysosomenassoziierte Membranprotein 2 (LAMP-2), ein reichlich vorkommendes Glykoprotein der lysosomalen Begrenzungsmembran, das zur Integrität der Lysosomen, zum Vesikeltransport und zur Abbaukapazität beiträgt. LAMP-2 ist an autophagiebezogenen Signalwegen beteiligt, darunter der chaperonvermittelten Autophagie und der Fusion von Autophagosomen mit Lysosomen, und beeinflusst damit den Umsatz langlebiger Proteine und Organellen. Eine Störung der LAMP-2-Funktion wird mit beeinträchtigter lysosomaler Homöostase, veränderten metabolischen Stressantworten und der Anreicherung autophagischer Substrate in Verbindung gebracht – Prozesse, die für Modelle der Kardiomyopathie und Neurodegeneration relevant sind. *Lamp2* wird daher häufig in Zusammenhängen untersucht, die den endolysosomalen Transport, die Proteostase und entzündliche Signalwege betreffen, die durch defekte zelluläre Clearance angetrieben werden.
LAMP-2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Lamp2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Lamp2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Lamp2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Lamp2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.