Laminin γ-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401068-NIC

LAMC2 codifica la laminina γ2, una subunità chiave della laminina-332 nelle membrane basali, che supporta l’adesione, la polarità e la migrazione epiteliale attraverso interazioni con le integrine e altri recettori della matrice extracellulare. La laminina γ2 contribuisce all’organizzazione degli emidesmosomi e al rimodellamento della matrice, coordinando la segnalazione tramite le vie delle adesioni focali, PI3K–AKT e MAPK, che influenzano la dinamica del citoscheletro e la sopravvivenza cellulare. Un’espressione alterata di LAMC2 o modifiche dell’architettura della laminina-332 sono associate a una compromissione dell’integrità epidermica e a interazioni anomale tra epitelio e stroma, e sono state studiate in contesti di danno tissutale e displasia epiteliale. In quanto determinante associato alla ECM della funzione di barriera e della motilità, LAMC2 è spesso oggetto di studio in modelli di invasione, riepitelizzazione delle ferite e segnalazione della matrice extracellulare.

Laminin γ-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAMC2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAMC2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAMC2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAMC2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.