Laminin γ-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401068-ACT

LAMC2 codifica la laminina gamma-2, una subunità chiave della laminina-332 nella membrana basale che sostiene l’adesione, la polarità e la migrazione delle cellule epiteliali tramite segnali mediati dalle integrine. Interagendo con recettori quali integrina α3β1 e α6β4, la laminina-332 modula la dinamica delle adesioni focali, la stabilità degli emidesmosomi e vie di segnalazione a valle, incluse FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK. L’espressione di LAMC2 è strettamente legata al rimodellamento della matrice extracellulare e alla riepitelizzazione delle ferite, dove influenza la motilità dei cheratinociti e l’integrità del tessuto. Una disregolazione della laminina gamma-2 è stata associata ad alterazioni della funzione di barriera epiteliale e a fenotipi invasivi in diversi contesti patologici, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione tra matrice extracellulare e cellula.

Laminin γ-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin γ-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin γ-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin γ-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin γ-2 nelle cellule tumorali con espressione di LAMC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.