Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Laminin β-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402636-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Laminin β-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Laminin β-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Laminin β-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LAMB3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Laminin β-3: sc-133178
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Laminin β-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402636-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Laminin β-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402636-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMB3 kodiert Laminin β-3, eine essentielle Untereinheit von Laminin-332 (α3β3γ2), einem Glykoprotein der Basalmembran, das die Architektur der extrazellulären Matrix organisiert und die Adhäsion, Polarität und Migration von Epithelzellen fördert. Über Interaktionen mit Integrinen wie α3β1 und α6β4 unterstützt Laminin-332 die Bildung von Hemidesmosomen und moduliert Signalwege der fokalen Adhäsion, die die Zytoskelettdynamik und die Gewebeintegrität beeinflussen. LAMB3-abhängige Matrixsignale sind zentral für die Barrierefunktion von Epidermis und Schleimhäuten, und eine veränderte Expression oder Organisation von Laminin-332 wurde mit Erkrankungen mit erhöhter Hautfragilität sowie mit invasivem Verhalten in epithelialen Tumoren in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen LAMB3 zu einem häufig genutzten Ziel zur Untersuchung der Biologie der Basalmembran, der Zell-Matrix-Signalübertragung und des epithelialen Remodelings.
Laminin β-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LAMB3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LAMB3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LAMB3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LAMB3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.