Laminin β-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402636-NIC

LAMB3 codifica la laminina β-3, una subunità essenziale della laminina-332 (α3β3γ2), una glicoproteina della membrana basale che organizza l’architettura della matrice extracellulare e promuove l’adesione, la polarità e la migrazione delle cellule epiteliali. Attraverso interazioni con integrine quali α3β1 e α6β4, la laminina-332 sostiene l’assemblaggio degli emidesmosomi e modula le vie di segnalazione delle adesioni focali che influenzano la dinamica del citoscheletro e l’integrità tissutale. I segnali della matrice dipendenti da LAMB3 sono centrali per la funzione di barriera dell’epidermide e delle mucose, e un’espressione o un’organizzazione alterata della laminina-332 è stata associata a patologie da fragilità cutanea e a comportamento invasivo nei tumori epiteliali. Queste caratteristiche rendono LAMB3 un bersaglio ampiamente utilizzato per lo studio della biologia della membrana basale, della segnalazione cellula–matrice e del rimodellamento epiteliale.

Laminin β-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAMB3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAMB3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAMB3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAMB3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.