Plasmide Double Nickase (h) Laminin β-1: sc-401105-NIC

LAMB1 code la laminine β‑1, une sous-unité essentielle de plusieurs hétérotrimères de laminine qui s’assemblent dans les membranes basales et organisent l’architecture de la matrice extracellulaire. Par ses interactions avec les intégrines, le dystroglycane et d’autres composants matriciels, la laminine β‑1 soutient l’adhésion cellulaire, la polarité, la migration et la survie, en influençant des nœuds de signalisation tels que la kinase d’adhérence focale (FAK) et PI3K/AKT, ainsi que la dynamique du cytosquelette. Dans les tissus humains, LAMB1 contribue aux propriétés de barrière des épithéliums et des endothéliums et oriente des processus du développement, notamment l’extension neuritique et la morphogenèse tissulaire. Une composition altérée des laminines ou une assemblage perturbé des membranes basales impliquant LAMB1 a été associé à des défauts structurels congénitaux et peut moduler des phénotypes invasifs et fibrosants dans des modèles pertinents pour la maladie.

Laminin β-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.