Laminin β-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401105-NIC

LAMB1 codifica la laminina β-1, una subunità fondamentale di numerosi eterotrimeri di laminina che si assemblano nelle membrane basali e organizzano l’architettura della matrice extracellulare. Attraverso interazioni con integrine, distroglicano e altri componenti della matrice, la laminina β-1 sostiene l’adesione cellulare, la polarità, la migrazione e la sopravvivenza, influenzando nodi di segnalazione come la focal adhesion kinase e PI3K/AKT, oltre alla dinamica del citoscheletro. Nei tessuti umani, LAMB1 contribuisce alle proprietà di barriera epiteliali ed endoteliali e guida processi di sviluppo, inclusi la crescita dei neuriti e la morfogenesi dei tessuti. Alterazioni della composizione delle laminine o un assemblaggio compromesso della membrana basale che coinvolga LAMB1 sono stati associati a difetti strutturali congeniti e possono modulare fenotipi invasivi e fibrotici in modelli pertinenti alla patologia.

Laminin β-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAMB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAMB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAMB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAMB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.