Plasmide CRISPR d'Activation (h) Laminin β-1: sc-401105-ACT

LAMB1 code la laminine β1, une sous-unité essentielle de plusieurs hétérotrimères de laminine qui constituent un composant structural et de signalisation majeur des membranes basales. La laminine β1 soutient l’assemblage de la matrice extracellulaire, l’adhésion cellulaire, la polarité et la migration via des interactions avec les intégrines et d’autres récepteurs de la matrice, en modulant des voies telles que la signalisation des adhérences focales et le remodelage du cytosquelette. En contribuant à l’intégrité de la membrane basale et à la communication cellule–matrice, la laminine β1 participe à l’architecture tissulaire des épithéliums, de la vasculature et des compartiments du système nerveux. Une expression dérégulée de LAMB1 ou une organisation anormale de la membrane basale est fréquemment étudiée dans le cadre de défauts du développement, de la biologie de l’invasion tumorale et des métastases, ainsi que de microenvironnements fibreux ou inflammatoires.

Laminin β-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Laminin β-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Laminin β-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Laminin β-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Laminin β-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.