Plasmide CRISPR/Cas9 KO Laminin α-3 (m): sc-421376

Présentation

Lama3 code la laminine α‑3, une sous-unité clé de la laminine‑332, qui s’intègre aux membranes basales afin de soutenir l’adhésion des cellules épithéliales, leur polarité et leur migration dirigée. En se liant aux intégrines et en coopérant avec les composants des hémidesmosomes, la laminine α‑3 contribue à coordonner la dynamique des adhésions focales et l’organisation du cytosquelette via des voies de signalisation couplées à l’adhérence telles que FAK/SRC et PI3K–AKT. Dans les tissus murins, Lama3 participe à l’ancrage derme‑épiderme et à l’intégrité de la barrière épithéliale, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des contextes de réépithélialisation altérée des plaies et d’interactions épithélio‑stromales modifiées. Des modèles expérimentaux ciblant Lama3 sont utilisés pour explorer l’assemblage de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction cellule–matrice et le remodelage de la membrane basale, pertinents pour l’homéostasie tissulaire et les microenvironnements associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Laminin α-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lama3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lama3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lama3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Laminin α-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lama3 pour l'étude de la signalisation de Laminin α-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lama3 essentiels à la fonction de Laminin α-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lama3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Laminin α-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Laminin α-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lama3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Laminin α-3 plasmide HDR (m) et le Laminin α-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lama3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lama3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.