Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) L-type Ca++ CP β2: sc-403900-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)L-type Ca++ CP β2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa L-type Ca++ CP β2 (h) y el plásmido de doble nickasa L-type Ca++ CP β2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CACNB2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: L-type Ca++ CP β2 Anticuerpo (F-29): sc-81890
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) L-type Ca++ CP β2 | sc-403900-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) L-type Ca++ CP β2 | sc-403900-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNB2 codifica la subunidad auxiliar β2 de los canales de calcio tipo L dependientes de voltaje, regulando el tráfico del canal, su expresión en la membrana y la cinética de compuerta que determina la entrada de Ca2+ durante la despolarización. Al modular la actividad de los canales CaV1, CACNB2 influye en el acoplamiento excitación–contracción, la transmisión sináptica y la regulación génica dependiente de la actividad a través de vías sensibles al calcio como CaMK y la señalización calcineurina/NFAT. Las alteraciones en la función de CACNB2 se han asociado con anomalías eléctricas y de señalización en tejidos excitables y se estudian con frecuencia en el contexto de la susceptibilidad a arritmias, fenotipos neuropsiquiátricos y otros trastornos relacionados con canales de calcio. Como subunidad accesoria, β2 también afecta la sensibilidad farmacológica y las propiedades biofísicas de las corrientes de Ca2+ tipo L, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de canalopatías.
L-type Ca++ CP β2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CACNB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CACNB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CACNB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CACNB2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.