KV4.2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402801-NIC

KCND2 codifica per la subunità del canale del potassio voltaggio-dipendente KV4.2, un mediatore principale delle correnti di tipo A del K+ a rapida inattivazione, che modellano la ripolarizzazione del potenziale d’azione, la frequenza di scarica e l’eccitabilità dendritica nelle cellule eccitabili. La funzione di KV4.2 è regolata attraverso l’assemblaggio del complesso canale e input di segnalazione, inclusi la fosforilazione e le interazioni con proteine ausiliarie che modulano gating, traffico e localizzazione di membrana. Controllando l’eccitabilità e l’integrazione sinaptica, KCND2 contribuisce alla segnalazione neuronale dipendente dall’attività e alle dinamiche di ripolarizzazione rilevanti per l’elettrofisiologia cardiaca. Alterazioni dell’espressione di KCND2/KV4.2 o delle proprietà del canale sono state associate a disturbi della segnalazione elettrica, inclusi fenotipi neuroevolutivi e correlati alle crisi epilettiche, nonché una suscettibilità legata alle aritmie in studi focalizzati sull’elettrofisiologia.

KV4.2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCND2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCND2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCND2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCND2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.