KV1.5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404341

Übersicht

KCNA5 kodiert die humane spannungsabhängige Kaliumkanal‑Untereinheit KV1.5, einen verzögert gleichrichtenden K+-Kanal, der den ultrarapiden verzögerten Gleichrichterstrom (IKur) leitet und die Membranrepolarisation sowie die Erregbarkeit mitprägt. Die KV1.5‑Aktivität beeinflusst die Aktionspotenzialdauer, Refraktäreigenschaften und Ca2+-abhängige Signalwege, indem sie das Membranpotenzial in elektrisch aktiven Zellen steuert, und ist damit mit übergeordneten Prozessen der Ionenhomöostase und der elektrophysiologischen Umgestaltung verknüpft. Veränderte KCNA5‑Expression oder Kanalfunktion wurden mit Änderungen der atrialen Elektrophysiologie und arrhythmieassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem wird das Gen in Kontexten untersucht, in denen K+-Flüsse Proliferation und Migration modulieren. Entsprechend wird KCNA5 häufig im Zusammenhang mit Mechanismen des atrialen Remodelings, Kanalopathien und Signalnetzwerken untersucht, die empfindlich auf die Dynamik des Membranpotenzials reagieren.

Das KV1.5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNA5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNA5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNA5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KV1.5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNA5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KV1.5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNA5-Exone abzielen, die für die KV1.5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNA5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KV1.5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KV1.5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNA5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KV1.5 HDR-Plasmid (h) und KV1.5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNA5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNA5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.