KV1.1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403806-ACT

KCNA1 codifica a subunidade humana do canal de potássio dependente de voltagem KV1.1 (KCN A1), um determinante essencial da repolarização da membrana e do disparo de potenciais de ação em células excitáveis. O KV1.1 contribui para correntes de K+ do tipo retificador tardio que regulam a excitabilidade neuronal, a transmissão sináptica e a sincronização de redes, integrando-se a vias que controlam a homeostase iónica e a sinalização dependente de atividade. Alterações na função ou na expressão de KCNA1 estão associadas a distúrbios da sinalização elétrica, incluindo ataxia episódica e fenótipos relacionados com crises convulsivas, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de canalopatias. In vitro, a modulação de KCNA1 apoia a investigação em eletrofisiologia, limiares de excitabilidade e respostas transcricionais a jusante a alterações do potencial de membrana.

KV1.1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KV1.1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KV1.1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KV1.1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KV1.1 em células tumorais com expressão de KCNA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.