Plásmido CRISPR de Activación (h) KV1.1: sc-403806-ACT

KCNA1 codifica la subunidad humana del canal de potasio dependiente de voltaje KV1.1 (KCNA1), un determinante clave de la repolarización de la membrana y de la generación de potenciales de acción en células excitables. KV1.1 contribuye a las corrientes de K+ rectificadoras tardías que regulan la excitabilidad neuronal, la transmisión sináptica y la sincronización de redes, integrándose con vías que controlan la homeostasis iónica y la señalización dependiente de la actividad. La alteración de la función o la expresión de KCNA1 se asocia con trastornos de la señalización eléctrica, incluida la ataxia episódica y fenotipos relacionados con convulsiones, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de canalopatías. In vitro, la modulación de KCNA1 facilita la investigación en electrofisiología, umbrales de excitabilidad y respuestas transcripcionales aguas abajo ante cambios en el potencial de membrana.

KV1.1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KV1.1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KV1.1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KV1.1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KV1.1 en células tumorales con expresión de KCNA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.