KOR-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402526

Descripción general

OPRL1 codifica el receptor de nociceptina/orfanina FQ (también denominado KOR-3), un GPCR de clase A que se acopla principalmente a Gi/Go para suprimir la actividad de la adenilil ciclasa, reducir la señalización de AMPc y modular la conductancia de los canales iónicos. La activación del receptor regula la transmisión sináptica y la excitabilidad neuronal, influyendo en el control mediado por neuropéptidos del procesamiento del dolor, la respuesta al estrés, los circuitos de recompensa y las funciones autonómicas. La señalización aguas abajo converge con las vías MAPK/ERK, el tráfico dependiente de β-arrestina y los procesos de desensibilización/internalización del receptor, que modelan las respuestas celulares a lo largo del tiempo. Se ha asociado una señalización alterada de OPRL1/KOR-3 con fenotipos neuropsiquiátricos y neuroconductuales, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la regulación de redes neuronales y la dinámica de la señalización de GPCR.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KOR-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen OPRL1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del OPRL1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de OPRL1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KOR-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en OPRL1 para la investigación de la señalización de KOR-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de OPRL1 críticos para la función de KOR-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de OPRL1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KOR-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KOR-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus OPRL1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KOR-3 (h) y el plásmido HDR KOR-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología OPRL1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana OPRL1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.