Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (h): sc-402244
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- KIR4.1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique KIR4.1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KIR4.1 Antibody (1C11): sc-293252
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (h) | sc-402244 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène humain KCNJ10 code le canal potassique à rectification entrante KIR4.1, une protéine membranaire qui contribue à établir le potentiel de repos et régule le tamponnement du potassium ainsi que la redistribution spatiale de K+ dans les contextes gliaux et épithéliaux. KIR4.1 soutient l’homéostasie des ions et de l’eau grâce à un couplage fonctionnel avec des processus de transport et participe au maintien du K+ extracellulaire et de l’équilibre osmotique, influençant l’excitabilité neuronale et la stabilité du microenvironnement tissulaire. Une activité dérégulée de KCNJ10/KIR4.1 a été associée à une physiologie gliale altérée, à une homéostasie ionique perturbée et à des phénotypes neurologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies de signalisation dépendantes des canaux ioniques et des mécanismes homéostatiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNJ10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNJ10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNJ10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR4.1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNJ10 pour l'étude de la signalisation de KIR4.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de KCNJ10 essentiels à la fonction de KIR4.1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNJ10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le KIR4.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIR4.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNJ10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le KIR4.1 plasmide HDR (h) et le KIR4.1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNJ10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNJ10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.