KIR3DL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406227

Panoramica

KIR3DL3 codifica un recettore inibitorio tipo immunoglobulinico delle cellule killer (KIR), espresso in sottopopolazioni di cellule NK e di linfociti T, dove contribuisce alla sorveglianza immunitaria attenuando la citotossicità e il rilascio di citochine tramite il reclutamento, dipendente da ITIM, di fosfatasi come SHP-1/2. Modulando la segnalazione a valle dei recettori attivatori, KIR3DL3 aiuta a regolare l’equilibrio tra attivazione immunitaria e tolleranza, influenzando i circuiti che governano la funzione effettrice dei linfociti e il riconoscimento delle cellule bersaglio. La variabilità nel contenuto e nell’espressione dei geni KIR è spesso studiata nel contesto delle interazioni immunitarie dipendenti dall’HLA, con implicazioni per l’immunologia dei tumori, le risposte antivirali e l’immunobiologia dei trapianti. Una segnalazione deregolata dei recettori inibitori può modificare i “set point” immunitari nelle infezioni croniche, nell’autoimmunità e nell’evasione immunitaria associata al cancro, rendendo KIR3DL3 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione inibitoria di tipo checkpoint nei linfociti innati e innato-simili.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR3DL3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KIR3DL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KIR3DL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KIR3DL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR3DL3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KIR3DL3 per lo studio della segnalazione di KIR3DL3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KIR3DL3 critici per la funzione di KIR3DL3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KIR3DL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR3DL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIR3DL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KIR3DL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR3DL3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIR3DL3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KIR3DL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KIR3DL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.