Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR3DL3 (h): sc-406227

Présentation

KIR3DL3 code un récepteur inhibiteur de type immunoglobuline des cellules tueuses (KIR), exprimé par des sous-populations de cellules NK et de lymphocytes T, où il contribue à la surveillance immunitaire en atténuant la cytotoxicité et la libération de cytokines via le recrutement, dépendant des ITIM, de phosphatases telles que SHP-1/2. En modulant la signalisation en aval des récepteurs activateurs, KIR3DL3 aide à ajuster l’équilibre entre activation immunitaire et tolérance, en influençant les voies qui régissent la fonction effectrice des lymphocytes et la reconnaissance des cellules cibles. Les variations du contenu et de l’expression des gènes KIR sont fréquemment étudiées dans le contexte des interactions immunitaires dépendantes des HLA, avec des implications pour l’immunologie tumorale, les réponses antivirales et l’immunobiologie de la transplantation. Une signalisation dérégulée des récepteurs inhibiteurs peut modifier les seuils de réponse immunitaire dans l’infection chronique, l’auto-immunité et l’échappement immunitaire associé au cancer, faisant de KIR3DL3 une cible utile pour des études mécanistiques de régulation inhibitrice de type « checkpoint » dans les lymphocytes de l’immunité innée et apparentés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR3DL3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KIR3DL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KIR3DL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KIR3DL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR3DL3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KIR3DL3 pour l'étude de la signalisation de KIR3DL3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KIR3DL3 essentiels à la fonction de KIR3DL3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KIR3DL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIR3DL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIR3DL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KIR3DL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIR3DL3 plasmide HDR (h) et le KIR3DL3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KIR3DL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KIR3DL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.