KIR2.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401974

Descripción general

KCNJ2 codifica el canal humano de potasio rectificador entrante Kir2.1, un determinante clave del potencial de membrana en reposo y de la excitabilidad en el músculo cardíaco y esquelético. Kir2.1 conduce corrientes IK1 que estabilizan la repolarización terminal y dan forma a las ondas del potencial de acción, integrándose con procesos de tráfico de membrana y de compuerta dependiente de PIP2. Las alteraciones en la función de KCNJ2 se asocian con fenotipos de canalopatía como el síndrome de Andersen–Tawil y pueden influir en la susceptibilidad a arritmias, la parálisis periódica y la señalización del desarrollo en tejidos excitables. En modelos celulares, la actividad de Kir2.1 se relaciona con la homeostasis electrofisiológica, el manejo del calcio y la regulación de la expresión génica dependiente del potencial de membrana.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIR2.1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNJ2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNJ2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNJ2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIR2.1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNJ2 para la investigación de la señalización de KIR2.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNJ2 críticos para la función de KIR2.1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNJ2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIR2.1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIR2.1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNJ2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIR2.1 (h) y el plásmido HDR KIR2.1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNJ2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNJ2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.