Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF4A (h): sc-411788

Présentation

KIF4A code une protéine motrice de la famille des kinésines qui s’associe aux microtubules et à la chromatine afin de coordonner l’organisation du fuseau mitotique, la condensation des chromosomes et leur ségrégation en anaphase. Elle intervient dans des processus clés du cycle cellulaire, notamment la cytocinèse et la régulation de la dynamique de la zone médiane du fuseau, contribuant ainsi à une répartition fidèle du génome lors des divisions prolifératives. L’activité de KIF4A s’inscrit également à l’interface des voies de réponse aux dommages de l’ADN et de remodelage de la chromatine, qui influencent la stabilité du génome et l’issue du stress réplicatif. Une expression dérégulée de KIF4A a été associée à des phénotypes prolifératifs et à des signatures d’instabilité génomique observées dans divers contextes de recherche sur le cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des vulnérabilités liées à la mitose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF4A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KIF4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KIF4A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KIF4A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIF4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KIF4A pour l'étude de la signalisation de KIF4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KIF4A essentiels à la fonction de KIF4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KIF4A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIF4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIF4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KIF4A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIF4A plasmide HDR (h) et le KIF4A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KIF4A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KIF4A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.