Plasmide CRISPR d'Activation (h) KIF2C: sc-404645-ACT

KIF2C (également connu sous le nom de MCAK) code une dépolymérase des microtubules de la famille des kinésines-13, qui régule la dynamique des microtubules du fuseau et les interactions kinétochore–microtubule pendant la mitose. En favorisant le renouvellement des microtubules, KIF2C contribue à une congression et une ségrégation correctes des chromosomes au cours du cycle cellulaire, ainsi qu’aux processus associés au point de contrôle mitotique. Une expression ou une activité dérégulée de KIF2C est liée à l’instabilité chromosomique et à l’aneuploïdie, des phénotypes moléculaires fréquemment observés dans la biologie des maladies prolifératives. En conséquence, KIF2C est largement étudié dans les voies qui gouvernent la fidélité mitotique, l’organisation des centrosomes et du fuseau, ainsi que le maintien du génome.

KIF2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KIF2C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KIF2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KIF2C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KIF2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KIF2C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KIF2C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KIF2C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KIF2C dans les cellules tumorales présentant une expression de KIF2C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.