KCTD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412124

Übersicht

KCTD3 (potassium channel tetramerization domain containing 3) kodiert ein BTB/POZ-Domänen-haltiges Protein, das an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist, welche die Assemblierung von Multiproteinkomplexen beeinflussen und die Proteostase mitsteuern können. Mitglieder der KCTD-Familie werden häufig mit der Biologie CUL3-(Cullin-3-)assoziierter Ubiquitin-Ligasen sowie mit der Regulation von Signalkomponenten durch gezielten Abbau in Verbindung gebracht, was auf Rollen bei der Feinabstimmung von Signalwegen und der zellulären Homöostase hindeutet. Über diese Interaktionsnetzwerke ist KCTD3 für Studien zur Kontrolle des Zellwachstums, zu Stressantworten und zu differenzierungsassoziierten Programmen relevant, in denen ubiquitinierungsabhängige Umbauprozesse eine zentrale Rolle spielen. Eine Fehlregulation BTB-/KCTD-zentrierter Komplexe wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen in der Krebsforschung und Neurobiologie in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von KCTD3 in mechanistischen Modellen veränderter Signalübertragung und der Proteinkontrolle unterstützt.

Das KCTD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCTD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCTD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCTD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCTD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCTD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCTD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCTD3-Exone abzielen, die für die KCTD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCTD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCTD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KCTD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCTD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCTD3 HDR-Plasmid (h) und KCTD3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCTD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCTD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.