KCNQ4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403090-LAC

KCNQ4 codifica una subunità di un canale del potassio voltaggio-dipendente che contribuisce alla ripolarizzazione di membrana e al controllo dell’eccitabilità cellulare attraverso correnti di tipo M. Regolando la conduttanza del potassio, KCNQ4 influenza la dinamica di generazione dei potenziali d’azione, l’omeostasi ionica e i programmi di segnalazione a valle dipendenti dall’attività nelle cellule eccitabili. Alterazioni della funzione o dell’espressione di KCNQ4 sono collegate a proprietà elettrofisiologiche compromesse e sono state associate a forme ereditarie di ipoacusia neurosensoriale, a supporto della sua rilevanza per la biologia del sistema uditivo. Queste caratteristiche rendono KCNQ4 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione dei canali del potassio, sulla trascrizione dipendente dall’eccitabilità e sulle relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale KCNQ4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KCNQ4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KCNQ4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KCNQ4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KCNQ4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KCNQ4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.