Plasmide CRISPR/Cas9 KO KCNQ3 (h): sc-403544

Présentation

KCNQ3 code la sous-unité Kv7.3 des canaux potassiques voltage‑dépendants qui véhiculent le courant M neuronal, un régulateur clé de l’excitabilité membranaire et de l’adaptation de la fréquence de décharge. En modulant les conductances sous‑seuil, KCNQ3 participe à des voies qui contrôlent le seuil de déclenchement des potentiels d’action, l’intégration synaptique et les oscillations des réseaux, souvent de concert avec des complexes de canaux contenant KCNQ2. La perturbation des courants médiés par KCNQ3 modifie la dynamique de décharge neuronale et a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et épileptiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du fonctionnement des circuits corticaux. KCNQ3 est également utilisé comme cible de lecture fonctionnelle dans des approches de pharmacologie des canaux ioniques et des workflows d’électrophysiologie visant à analyser les voies de signalisation liées à l’excitabilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KCNQ3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNQ3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNQ3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNQ3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KCNQ3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNQ3 pour l'étude de la signalisation de KCNQ3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNQ3 essentiels à la fonction de KCNQ3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNQ3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KCNQ3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KCNQ3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNQ3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KCNQ3 plasmide HDR (h) et le KCNQ3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNQ3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNQ3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.