KCNE1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404317-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KCNE1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KCNE1 Double-Nickase-Plasmid (h) und KCNE1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNE1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KCNE1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404317-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KCNE1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404317-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNE1 kodiert eine Single-Pass-Transmembran-β‑Untereinheit, die die Funktion spannungsabhängiger Kaliumkanäle moduliert – insbesondere des KCNQ1/Kv7.1‑Komplexes, der den langsam verzögert rektifizierenden Strom (IKs) trägt. Durch die Feinabstimmung der Kanal‑Gating‑Kinetik, des Membrantransports (Traffickings) und der pharmakologischen Sensitivität trägt KCNE1 zur Regulation der kardialen Repolarisation und der zellulären Erregbarkeit bei. Diese Aktivität verknüpft KCNE1 mit elektrophysiologischen Signalwegen, die die Dauer des Aktionspotenzials und die Ionenhomöostase in Kardiomyozyten und anderen erregbaren Geweben steuern. Genetische Varianten oder eine dysregulierte Expression von KCNE1 wurden mit einer erblichen Arrhythmieanfälligkeit sowie auditorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, vermittelt durch Effekte auf den Kaliumfluss im Herzen und im Innenohr.
KCNE1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNE1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNE1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNE1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNE1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.