Plásmido CRISPR de Activación (h) KChIP2: sc-403327-ACT

KCNIP2 codifica la proteína sensor neuronal de calcio KChIP2, una subunidad auxiliar con motivo EF-hand de unión a Ca2+ que modula los canales de potasio dependientes de voltaje tipo A de la familia Kv4. Al ajustar la cinética de compuerta del canal y su expresión en la superficie celular, KChIP2 influye en la excitabilidad de la membrana, la repolarización del potencial de acción y la señalización dependiente de Ca2+ en tejidos excitables, incluidos el corazón y el sistema nervioso. La alteración de la expresión de KCNIP2/KChIP2 se ha vinculado con el remodelado eléctrico y la susceptibilidad a arritmias, y también se estudia en el contexto de la excitabilidad neuronal y de programas transcripcionales sensibles al estrés. Estas propiedades hacen de KCNIP2 un nodo útil para analizar la regulación de canales iónicos, las interacciones proteicas dependientes de calcio y vías relevantes para la electrofisiología.

KChIP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNIP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KChIP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNIP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNIP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KChIP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNIP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KChIP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KChIP2 en células tumorales con expresión de KCNIP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.