Plásmido Doble Nickase (h) karyopherin β2: sc-403099-NIC

TNPO1 codifica la carioferina β2 (transportina-1), un receptor de importación nuclear regulado por RanGTP que reconoce señales de localización nuclear (NLS) de tipo PY y media el transporte selectivo de proteínas de unión a ARN y otras cargas a través del complejo del poro nuclear. Esta vía de importación sostiene el metabolismo del ARN, la dinámica de los gránulos de estrés y la compartimentación núcleo-citoplasmática de factores reguladores, vinculando la actividad de TNPO1 con el control de la expresión génica y la proteostasis. La alteración del tráfico dependiente de transportina se ha asociado con trastornos del procesamiento de ARN y con fenotipos de agregación proteica observados en la biología relacionada con la neurodegeneración, así como con programas de señalización proliferativa en modelos de cáncer. En consecuencia, TNPO1 se estudia con frecuencia para desentrañar los mecanismos de especificidad del transporte nuclear, el acoplamiento al ciclo de Ran y cómo las proteínas de unión a ARN (RBP) deslocalizadas afectan la homeostasis celular.

karyopherin β2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNPO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNPO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNPO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNPO1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.