karyopherin β2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403099-NIC

TNPO1 codifica la carioferina β2 (transportina-1), un recettore di importazione nucleare regolato da RanGTP che riconosce segnali di localizzazione nucleare di tipo PY e media il trasporto selettivo di proteine leganti l’RNA e di altri carichi attraverso il complesso del poro nucleare. Questa via di importazione supporta il metabolismo dell’RNA, la dinamica dei granuli di stress e la compartimentalizzazione nucleo-citoplasmatica di fattori regolatori, collegando l’attività di TNPO1 al controllo dell’espressione genica e alla proteostasi. Alterazioni del traffico dipendente dalla transportina sono state associate a perturbazioni del processamento dell’RNA e a fenotipi di aggregazione proteica osservati nella biologia legata alla neurodegenerazione, nonché a programmi di segnalazione proliferativa in modelli di cancro. Di conseguenza, TNPO1 è spesso studiato per chiarire i meccanismi della specificità del trasporto nucleare, l’accoppiamento con il ciclo di Ran e il modo in cui le RBP mal localizzate influenzano l’omeostasi cellulare.

karyopherin β2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNPO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNPO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNPO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNPO1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.