Plasmide CRISPR/Cas9 KO JunD (h): sc-400713

Présentation

JUND code pour JunD, un facteur de transcription à fermeture éclair leucine basique (bZIP) de la famille AP-1, qui dimérise avec les protéines JUN et FOS afin de réguler l’expression génique en réponse aux stimuli. JunD intègre la signalisation MAPK et les signaux inflammatoires pour contrôler la progression du cycle cellulaire, la différenciation, les réponses au stress oxydatif et l’apoptose, via la modulation transcriptionnelle de promoteurs et d’amplificateurs (enhancers). Il contribue aux programmes de chromatine et de transcription en aval des cytokines et des facteurs de croissance, influençant des processus tels que le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation immunitaire. Une activité AP-1 dérégulée impliquant JunD a été associée à une prolifération altérée, à l’adaptation au stress et à des phénotypes liés aux tumeurs dans de multiples contextes tissulaires, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JunD (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène JUND dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du JUND, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert JUND à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JunD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en JUND pour l'étude de la signalisation de JunD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de JUND essentiels à la fonction de JunD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de JUND pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JunD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le JunD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus JUND. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JunD plasmide HDR (h) et le JunD (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie JUND pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles JUND définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.