Plásmido Doble Nickase (h) Junctophilin-2: sc-401805-NIC

JPH2 codifica la junctofilina-2, una proteína estructural de puenteo de membranas que estabiliza los complejos de membrana de unión entre la membrana plasmática y el retículo sarcoplásmico/endoplásmico. Al anclar estas membranas, la junctofilina-2 ayuda a organizar microdominios de acoplamiento excitación–contracción y favorece una liberación eficiente de calcio inducida por calcio mediante el posicionamiento coordinado de los canales de Ca²⁺ tipo L y los receptores de rianodina. La arquitectura dependiente de JPH2 contribuye a la homeostasis del Ca²⁺, a la señalización regulada por Ca²⁺ aguas abajo y a la función del sarcómero en células musculares estriadas. Las alteraciones en la expresión o la función de JPH2 se han asociado con remodelado de las diadas vinculado a cardiomiopatías, un manejo anómalo del Ca²⁺ y fenotipos celulares arritmogénicos relevantes para el modelado de enfermedades cardiovasculares.

Junctophilin-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus JPH2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de JPH2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de JPH2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con JPH2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.