Junctophilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401805

Übersicht

JPH2 kodiert Junctophilin-2, ein membranverankerndes Protein, das junktionsartige Membrankomplexe zwischen der Plasmamembran bzw. den T-Tubuli und dem sarkoplasmatischen Retikulum in quergestreifter Muskulatur stabilisiert. Durch die Aufrechterhaltung der Kopplung im Nanomaßstab zwischen L‑Typ‑Ca²⁺-Kanälen und Ryanodinrezeptoren unterstützt Junctophilin-2 die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung und eine effiziente intrazelluläre Ca²⁺-Freisetzung. Die Funktion von JPH2 überschneidet sich mit Ca²⁺-Regulationswegen, die Kontraktilität, elektrische Signalgebung und nachgeschaltete, calciumabhängige Transkriptionsprogramme beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Organisation von JPH2 wurde mit einem T‑Tubulus‑Remodeling in Kardiomyozyten und einer gestörten Ca²⁺-Homöostase in Verbindung gebracht – Merkmale, die in experimentellen Modellen mit erblichen und erworbenen Kardiomyopathien sowie arrhythmogenen Phänotypen assoziiert sind.

Das Junctophilin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des JPH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des JPH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von JPH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Junctophilin-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von JPH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Junctophilin-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf JPH2-Exone abzielen, die für die Junctophilin-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere JPH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Junctophilin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Junctophilin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des JPH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Junctophilin-2 HDR-Plasmid (h) und Junctophilin-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von JPH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten JPH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.