Particules Lentivirales d'Activation (h) JAK2: sc-400246-LAC

La kinase Janus 2 (JAK2) est une tyrosine kinase non réceptrice qui transmet les signaux des récepteurs de cytokines et de facteurs de croissance aux facteurs de transcription STAT en aval, coordonnant des programmes qui gouvernent l’hématopoïèse, la différenciation des cellules immunitaires et les réponses inflammatoires. Au sein de la voie JAK–STAT, les cascades de phosphorylation induites par JAK2 modèlent la survie et la prolifération cellulaires et s’entrecroisent avec les voies MAPK et PI3K/AKT afin d’ajuster des effets dépendants du contexte. Une activité de JAK2 dérégulée et des dynamiques de signalisation altérées sont fortement associées aux néoplasies myéloprolifératives et à d’autres troubles hématologiques, et le remodelage des réseaux dépendant de JAK2 est également étudié dans la biologie des tumeurs solides et dans des modèles de maladies à médiation immunitaire. En tant que nœud central de signalisation, JAK2 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer l’initiation des signaux au voisinage des récepteurs, la sortie transcriptionnelle et la régulation par rétrocontrôle.

Les particules d'activation lentivirales JAK2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de JAK2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales JAK2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription JAK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de JAK2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif JAK2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.