IVD Plasmide Double Nickase (h): sc-405499-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IVD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IVD Double Nickase Plasmid (h) e il IVD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IVD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IVD Antibody (A-8): sc-514240
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IVD Plasmide Double Nickase (h) | sc-405499-NIC | 20 µg | $410.00 |
L’IVD umano codifica l’isovaleril‑CoA deidrogenasi, una flavoproteina mitocondriale che catalizza una tappa chiave di deidrogenazione nel catabolismo della leucina all’interno della famiglia delle acil‑CoA deidrogenasi. Trasferendo elettroni al sistema della flavoproteina di trasferimento degli elettroni (ETF), IVD sostiene il metabolismo energetico mitocondriale e influenza l’omeostasi redox durante il turnover degli amminoacidi. Varianti con perdita di funzione in IVD sono associate all’acidemia isovalerica, un disturbo caratterizzato dall’accumulo di metaboliti derivati dall’isovaleril‑CoA e da stress mitocondriale secondario. In ambito di ricerca, IVD viene utilizzato per studiare il metabolismo degli amminoacidi a catena ramificata, il controllo di qualità mitocondriale e la vulnerabilità metabolica in modelli di errori congeniti del metabolismo.
IVD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IVD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IVD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IVD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IVD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.