Plásmido Doble Nickase (m) ISCA1: sc-427272-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ISCA1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ISCA1 (m) y el plásmido de doble nickasa ISCA1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Isca1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ISCA1 | sc-427272-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ISCA1 | sc-427272-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen ISCA1 (Isca1) del ratón codifica una proteína mitocondrial de tipo A implicada en la maduración de los clústeres hierro-azufre (Fe–S), que respalda la biogénesis de cofactores [4Fe–4S] requeridos por componentes de la cadena respiratoria y por numerosas enzimas metabólicas. A través de su función en las etapas tardías del ensamblaje de Fe–S, ISCA1 contribuye a la fosforilación oxidativa, a la homeostasis redox y al mantenimiento de la función mitocondrial bajo condiciones celulares variables de hierro. La alteración de las vías de clústeres Fe–S puede desestabilizar el mantenimiento del genoma mitocondrial y el transporte electrónico, lo que vincula la disfunción relacionada con ISCA1 a fenotipos de estrés bioenergético relevantes para mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuromusculares. Por ello, Isca1 se estudia con frecuencia en el contexto del metabolismo mitocondrial, la señalización de estrés y las redes enzimáticas dependientes de Fe–S.
ISCA1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Isca1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Isca1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Isca1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Isca1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.