IRF-7 Plasmide Double Nickase (h): sc-400450-NIC

Il fattore regolatore dell'interferone 7 (IRF7) codifica IRF-7, un regolatore trascrizionale "master" delle risposte interferoniche di tipo I a valle dei recettori di riconoscimento dei pattern, come i recettori di tipo RIG-I e i recettori Toll-like. In seguito all'attivazione dovuta al riconoscimento degli acidi nucleici virali, IRF-7 viene fosforilato e trasloca nel nucleo, dove induce l'espressione di IFN-α/β e dei geni stimolati dall'interferone, modellando l'immunità antivirale innata e la segnalazione infiammatoria. IRF7 integra la segnalazione mediata da TBK1/IKKε e coopera con NF-κB per coordinare reti citochiniche che influenzano l'attivazione delle cellule immunitarie e la presentazione dell'antigene. Un'attività di IRF7 deregolata è stata associata a una difesa antivirale alterata e a firme interferoniche aberranti osservate in diversi disturbi immunomediati e patologie associate all'infiammazione, rendendolo un bersaglio comune per studi meccanicistici sul controllo delle vie dell'interferone.

IRF-7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IRF7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IRF7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IRF7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IRF7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.