IRF-4 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421148-ACT

Il gene murino **Irf4** codifica **IRF-4**, un fattore di trascrizione arricchito nei linfociti che coordina programmi genici responsabili del controllo della differenziazione, dell’attivazione e della funzione effettrice delle cellule immunitarie. IRF-4 integra i segnali a valle dell’attivazione del recettore per l’antigene e gli input citochinici per regolare reti trascrizionali coinvolte nella maturazione delle cellule B, nello sviluppo delle plasmacellule, nella dinamica dei centri germinali e nella polarizzazione delle cellule T. Attraverso interazioni con partner quali **PU.1/SPI1**, i fattori della famiglia **BATF** e vie associate a **NF-κB**, IRF-4 contribuisce a modellare l’accessibilità della cromatina e l’utilizzo di enhancer specifici di linea cellulare. Un’attività di IRF-4 deregolata è associata a risposte immunitarie aberranti e a meccanismi di malattie infiammatorie, rendendo **Irf4** un nodo chiave per lo studio della segnalazione immunitaria e del controllo trascrizionale in modelli murini.

IRF-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Irf4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Irf4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Irf4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Irf4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-4 nelle cellule tumorali con espressione di Irf4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.