Plásmido CRISPR de Activación (h) IRE1α: sc-400576-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) IRE1α es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) IRE1α incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR IRE1α (h) y el plásmido de activación CRISPR IRE1α (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de ERN1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRE1α Anticuerpo (B-12): sc-390960
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) IRE1α | sc-400576-ACT | 20 µg | $397.00 |
ERN1 codifica la enzima 1 alfa dependiente de inositol (IRE1α), una cinasa/endoribonucleasa transmembrana residente en el RE que actúa como sensor central de la carga de proteínas mal plegadas e inicia la respuesta a proteínas desplegadas (UPR). Ante el estrés del RE, IRE1α se oligomeriza y activa su actividad RNasa para escindir (splicing) el ARNm de XBP1 y promover programas transcripcionales adaptativos, a la vez que activa la degradación regulada dependiente de IRE1 (RIDD) para modular la homeostasis del ARNm. Mediante la comunicación cruzada con las vías de señalización de PERK y ATF6, ERN1 coordina la proteostasis, el metabolismo lipídico y la señalización inflamatoria, influyendo en decisiones del destino celular entre la adaptación y la apoptosis. La actividad desregulada del eje IRE1α–XBP1 se ha implicado en contextos como la supervivencia de células tumorales bajo estrés, la disfunción metabólica y la neurodegeneración, lo que convierte a ERN1 en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la biología del estrés del RE.
IRE1α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ERN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
IRE1α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ERN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ERN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRE1α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ERN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRE1α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRE1α en células tumorales con expresión de ERN1 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.