Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRBP (h): sc-403810

Présentation

RBP3 code la protéine de liaison aux rétinoïdes de l’interphotorécepteur (IRBP), une grande glycoprotéine sécrétée produite par les photorécepteurs, qui s’accumule dans la matrice interphotoréceptrice et se lie aux rétinoïdes. L’IRBP contribue à l’homéostasie du cycle visuel en facilitant le transport et l’échange extracellulaires des rétinoïdes 11‑cis et tout‑trans entre les photorécepteurs et l’épithélium pigmentaire rétinien, favorisant ainsi la récupération de la phototransduction et la protection contre le stress oxydatif médié par les rétinoïdes. Par ces activités, l’IRBP influence le métabolisme des rétinoïdes, le trafic des lipides/rétinoïdes et des processus associés à la matrice extracellulaire, essentiels au fonctionnement de la rétine. Une expression ou une fonction altérée de RBP3/IRBP a été associée à des phénotypes de dysfonction rétinienne et est étudiée dans le contexte des mécanismes des maladies oculaires dégénératives et inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRBP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RBP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RBP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RBP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RBP3 pour l'étude de la signalisation de IRBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RBP3 essentiels à la fonction de IRBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RBP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IRBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RBP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRBP plasmide HDR (h) et le IRBP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RBP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RBP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.